河蒴荛花的有效成分研究

摘要：本实验采取新的分离手段，从瑞香科荛花属植物河蒴荛花的地上部分得到一种白色无定形粉末物，经鉴定为已知的河蒴荛花素。并用双波长扫描对河蒴荛花注射剂进行了定量。

    本药材系瑞香科Thynelacaceac荛花属wikstroenia植物河蒴荛花w.chamaldaphne的地上部分，别名：黄芫花、北芫花、药鱼梢，产于东北、西北、河北等地，性能：苦寒，有小毒，峻下逐水、通便，主治：水肿胀满、痰饮积聚，有用于精神病、神经官能症、急慢性肝炎、溃疡等，近些年来天津中药三厂将该植物的花蕾的醇提取物，制成1g生药/ml的无水乙醇注射剂，用于床，经早膜腹腔内注射，对中期(4～7月)，有中期引产的作用，引产多例，平均引产进行36小时，疗效100％，对母体的副作用很小。经我们实验表明，该植物完全可以用水提取，并且提取效果很好。

    取河蒴荛花的地上部分，用10倍量水加热提取2小时，共四次，将提取液浓缩，95％乙醇胶析，氯仿萃取，用CCD法分离，经乙醇：石油醚重结晶，为白色无定形粉末，收率为0.0011％，粉末的无水乙醇液给豚鼠腹腔注射，有较好的终止妊娠作用，河蒴荛花素有强烈的刺激作用。薄层斑点用偏矾酸铵-50％硫酸显色，告呈绿色，经加热转为红棕色，紫外光谱，红外光谱在1500cm处多一个吸收峰，河蒴荛花素在于热状态下不稳定，而变成淡黄色的晶状物。

实验部分

一、提取：

河蒴荛花地上部分粗粉

药渣                     提取物

                                                          稠膏

                                              滤液                    药渣

                                             流浸膏

                                              滤液

                                 氯仿层               上液层（含黄酮类）

                                  干物

二、分离：

    将上述的氯仿于物用50℃的水溶解数次，过滤，于分液漏斗中，采取CCD法进行分离。以苯为固定相，水为流动相，反流分布15次，取苯层，用偏矾酸铵-硫酸显色，结果为：

新华2号滤纸，以苯为展开剂。

    从层析中可以看出，1～8号瓶中为单一成分，10～15号瓶中亦为单成分，只有9号瓶中是双成分，实验由于纸层析时，分离纯度取的是99.73％，故可将9号瓶弃去，而又由于10～15号瓶中的成分含量少，几乎无法结晶，故亦弃去。

三、精制：

    合并l～8号瓶中的苯液，常温下挥尽苯，至干，得淡黄色砂粒状粉末，用石油醚：乙醚4:3转溶，再用石油醚：乙醚9:1结晶，重结晶，再后得一种白色无定形粉末，形成时，挂在结晶瓶周壁上向溶剂中伸展，成网状，似针状结晶，但不是结晶。

四、鉴定：

    1．花层鉴定：取少量白色粉末，溶于无水乙醇中，以硅胶GF245板展开，并以77级学生罗祥斌得到的河蒴荛花晶A(自命)为示踪点，用偏矾酸铵-50％硫酸显色。

展开剂：氯仿:甲醇  96:4

展开剂：苯:乙酸乙酯  7:3

展开剂：正丁醇

        结论：据77级的毕业论文中所述的薄层情况来看，由于他们所得品与标准品Rf值在不同条件下展开有差异，总是比标准品超前一个点的位置，而我们的所得品又比河晶A落后一个点，而且酚值几乎完全相同，因此我们所得物可以初步认作是河蒴荛花素。

        2．光谱鉴定：我们所得品谱图与上海药物所王成瑞谱图不尽相同。

        (1)红外光谱：我们所得品的谱图与标准品谱图相近，只是在1500cm处多了一个中强吸收峰，为C-O键的伸缩振动峰。分析其原因可能定所得品在干热状态下发生缩合的结果，因为只有缩合失水才有可能产生C-O键，而在1500cm处出现中强吸收峰。

        (2)紫外光谱-与标准品谱图峰经相差较大，峰数相同，其原因与所得品的变质有关，仪器不能调“100％”有关。

        (3)与河晶A谱对比：有许多不同，无论峰位或峰形，可见所得品非河晶A同物。

        结论：红外光谱、紫外光谱的相同，可以使我们以侧面推测我们所得品就是河蒴荛花素。

五、总结：

        以专层和谱图的两方面鉴定，我们看到所得品许多与河蒴荛花素相同的地方，这样我们所得品基本，可以定为是河蒴荛花素，遗憾的是光谱部分用的是变质的所得品，而与标准品谱稍有差异。

六、讨论：

    1．本实验的整个过程与经典的上柱分离根本不同，从所得品的鉴定结果来看，可以认为这个提取分离方法是可行的，这个方法有几个很突出的优点，就是：<1>实验周期短(3～4天)；<2>操作简单；<3>设备简单；<4>便于大规模工业生产；

    2．本实验改革的以往乙醇提取方法，如果应用于工业生产上，能大大提高经济效益；

    3．显色剂一般是偏矾酸铵1g，溶于100ml 50％硫酸中制成，显色时，河蒴荛花素先呈兰色，加热后不久退色，继而出现红棕色。但如果降低偏矾酸铵的量至0.5(g)，显色效果更好，另外也可用硝酸银溶液(2.5％)显色，呈黑色；

    4．从全成分的薄层展开来看，河晶A是河蒴荛花素的前一个成分；

    5．河蒴荛花素的结构及其性质：

    (1)结构：

        R₁=-H

        R₂=-CH₂(CH₂)₇ CH₃

河蒴荛花素

    (2)性质：河蒴荛花素易溶于氯仿、苯、乙醚、乙酸乙酯、乙醇中，易溶于水，微溶于石油醚；河蒴荛花素的稳定性较差，在干热状态下，极易氧化(或缩合)，色泽由白色变成黄色。黄色物质有固定的晶形，族晶状。

    (3)变质原因：一般的说是河蒴荛花素在于热状态下，易氧化，使原结构中的共轭体系增加而变黄。但是从河蒴荛花素的结构来看似乎没有可能发生氧化的部分；因此不如是说分子间缩合，使整个分子变大，而产生了黄色，可能缩合的方式如下：

    而且用这种方式，可以很好地解释红外光谱中1500cm处的中强吸收峰。

    河蒴荛花注射剂的含量测定

    一、河蒴荛花注射剂的制备工艺：

    1．制法：称500克生药装于1000ml的圆底烧瓶中，加85～95％乙醇加热回流2小时，同样趁热过滤，药渣这样进行回流两次，每次都加乙醇2000ml合并三次回流液，放冷后，再用双层定量滤纸过滤，除去沉淀，乙醇提取液减压回收乙醇至糖浆状，最好减压蒸干，再加550ml无水乙醇，加热促使有效成分溶解完全，加热时不能振摇，加热可以至沸，放冷后过滤，滤液置冰箱24小时，从冰箱中取3号重熔滤球过滤、分装，熔封于1ml安装瓶中，以100℃ 30分钟煮沸消毒、灯检、印字、包装即得。

    2．成品规格：本品为澄明深绿色灭菌无水乙醇溶液，每支装量为1ml，含河蒴荛花生药l克。

    二、准备工作：

    1．标准液的制备：取1.3(g)的河蒴荛花素定溶于5ml无水乙醇中，振荡，使之充分溶解；

    2．专层：用20×20的胶GF254板，展开前沿要大于15cm；

    3．展开剂：氯仿:甲醇96:4；

    4．显色剂：偏矾酸镀-50％硫酸，制法同前。

    三、双波长扫描仪的定量。

    1．显色后最大吸收峰：经扫描仪测定大吸收峰为415nm，峰谷是500nm，故参比波长应该是500nm。(实际使用的是600nm)。

    2．注射剂的含量测定：用微量推进器取注射液15ml，点于板上，再取15ml，标准品液为参比。用氯仿:甲醇96:4展开，要求前沿在15cm以上，用偏矾酸铵-50％硫酸显色，加热使显色稳定，放置，当硅胶完全变白(棕色点尤存)时，用双波长扫描仪测含量。

    3．公式推导：

                                              (1)

                                     (2)

    (1)代入(2)得：

    其中：C₁、C₂分别为标准品和样品的浓度；

          V₁、V₂分别为标准品和样品的点样体积；

          H₁、H₂分别为标准品和样品的积分值；

          V_总是样品的总体积；

          M是生药量

4．测试结果：

    标准液的浓度为1.3mg/5ml=0.26mg/ml。

    经计算可知，河蒴荛花素中含0.0269％的河蒴荛花素，注射剂的河蒴荛花素的浓度为0.869mg/ml。

    三、结论：通过计算得知，每支注射剂中含河蒴荛花素0．269mg，原药材含河蒴荛花0．0269％。

    四、讨论：

    1．使用日产先进的双波长扫描仪，可使得结果令人确信；

    2．采用这个手段，最重要的是方法简单，便于推广使用；

    3．显色稳定性的考查：显色后10分钟的百分含量值与放置24小时的值几乎完全相同，可以说偏矾酸铵-50％硫酸显色是稳定的；

    4．从计算结果来看，每支注射液仪含河蒴荛花素0.269mg，而且可以产生强有力的引产作用，因此在工业生产中要对整个工艺过程严格把关，及时监测各环节的含量变化，保证注射剂质量的稳定。在临床使用上要严格控制剂量，防止产生不良后果。

【参考资料】

1．《黄芫花的生药及制剂的研究的初步总结》    河北新医大学第二医烷

2．77级中药系罗祥斌的毕业论文

3．上海药物所王成瑞《药学通报》

(全文完)

完稿于85年6月28日晨

作者：杨军

后记：

    这是我的毕业论文，指导老师：台宝山教授，耿成国副教授。

    我们毕业小组三个人，我是组长

    组员：

    张振中：女，大学时期很漂亮，实习初期我们经常因为“实验”，在实验室呆到教学楼关门，就两个人！实习开始1个月后，情况发生了变化，她和另一个系的男生谈恋爱了，每天晚上围着教学楼“画圈”，就剩偶一人坚持并完成实验；

    张建平：男，我们班的首任班长，后被民主选举掉了，毕业前夕还和我打了一小架，以我的胜利而告终。第一次经济浪潮时下海了，开过KTV、干过水产批发、开过网吧，目前干什么不清楚，估计生活的挺平常！实习期间天天忙于打牌，几乎没有参与实习。

    我的毕业论文完成后，供组员传抄。论文答辩的结果更是匪夷所思，张振中-良好、杨军-中、张建平-及格，什么世道啊！写的不如抄的！几十年过去了，依然让我“耿耿于怀”。

2010年3月18日于上海